Çevrimdışı

Bu forumdaki linkleri ve resimleri görebilmek için en az 25 mesajınız olması gerekir.

AMAÇ ve KAPSAM

Tüm gıda numunelerinde S.aureus aranması amacını taşır.Staphylacoccus aureus; gram pozitif, yuvarlak, spor oluşturmayan, hareketsiz, katalaz pozitif, koagülaz pozitif bir bakteridir.Staphylococcus aureus; menenjit, septisemi ve yara iltihaplarına neden olmasının yanısıra, kusma, diare,bitkinlik ve terleme gibi belirtileri olan gıda zehirlenmelerine neden olur. Riskli gıdalar peynir, süt, krema, dondurma et ve et ürünleridir.

PRENSİP

S.aureus BP Agar’da bulunan potasyum telluriti indirger ve yumurta sarısını hidrolize eder.Bu nedenle yöntem besiyerinde etrafında zon bulunan siyah kolonilerin saptanarak koagülaz testi ile doğrulanması esasına dayanır.

Alet ve Ekipmanlar

Otoklav
Sterilizatör ( 160+5 oC)
İnkübatörler (35+1oC,)
Analitik teraziler (0.01g hassasiyette)
Su banyosu (80-100oC)
Stomacher
pH metre
Bunzen beki
Steril bıçak, pens,spatül, vb. malzemeler
Tüp karıştırıcı
Plastik steril petriler (15x90mm )
Otomatik pipet ve steril pipet ucu
Cam tüpler ve tüp sporlar
Erlen ,beher,mezür vb. standart laboratuvar cam malzemesi
Koloni sayacı
Mikrodalga

Kullanılan Besİyerlerİ

MAXİMUM RECOVERY DİLUENT :

Formül :

Pepton : 1,0 g

Sodium clorür : 8,5 g

Distile su : 1 litre

Tartılan hazır besiyeri içeriği distile su ile ısıtılarak çözündürülür. Otoklav sonrası pH 7+0,2 olacak şekilde ayarlanır. 121+1oC‘de 15 dakika sterilize edilir.

BAIRD-PARKER MEDİUM
Egg Yolk- Tellürite Emulsion :

Formül :

Tryptone : 10 g

Beef extract : 5 g

Yeast extract : 1 g

Sodium pyruvate : 10 g

Glycine : 12 g

Lithium chloride.6 H2O : 5 g

Agar : 20 g

Distile su : 1 litre

Tartılan hazır besiyeri içeriği distile su ile ısıtılarak çözündürülür. 121oC’de 15 dakika otoklav edilir.Hazır besiyerindeki etiketine göre pH ayarlaması yapılır ve aseptik koşullarda 50oC de Egg Yolk- Tellürite Emulsion ilave edilir. Karıştırılarak petrilere dökülür.

Staphylase Test yada liyofilize tavşan plazması

5. UYGULAMA

25 g(ml) örnek 225 ml (yada x numune miktarı x9 dilisyon sıvısı) Maximum Recovery Diluent ile gıda mikrobiyolojisi laboratuvar kurallarına uygun olarak homojenize edilir.1/10’luk dilüsyondan 0,4-0,3-0,3ml olarak önceden hazırlanmış BPA besiyeri petrilerine yayma yöntemine göre ekilir.Eğer numunedeki S.aureus sayısı yüksek bekleniyorsa seri dilisyonlar da yapılabilir.Ekim yapılan petriler 35+1oC de 45- 48 saat inkübasyona bırakılır.

48 saat sonra mat ortamda yuvarlak, konveks, pürüzsüz, dar, parlak zonlu bölge ile çevrili, 2-3mm çapındaki siyah-gri parlak koloniler muhtemel S. aureus kolonileridir.(bazı süt ürünleri ve yiyeceklerden identifiye edilen koloniler zonlu bölge oluşturmayabilir. )

5.1 Doğrulama Testi

Tipik kolonilere koagulaz testi uygulanır.Bunun için piyasada ticari olarak satılan koagülaz testler kullanılabildiği gibi liyofilize tavşan plazması da kullanılır.Hazır koagulaz testleri direk tipik koloniler alınıp uygulanabilir ve aglutinasyon oluşması gözlenir.,Liyofilize tavşan plazması kullanıldığında ise şüpheli koloniler küçük Brain Heart İnfusion Broth tüplerine alınıp 35 oC de18-24 saat zenginleştirdikten sonra üzerine sulandırılmış tavşan plazması eklenir ve 35 oC de inkübasyona bırakılır 6 saat sonra tüpler eğilip pıhtılaşmalar kontrol edilir.

Ek olarak aşağıdaki testlerde yapılabilir.
Biyokimyasal test Sonuç
Katalaz Testi +
Termonükleaz üretimi +
Glikozun anaerobik kullanımı +
Mannitolün anaerobik kullanımı +

6. Hesaplama

Staphylococcus aureus için tipik koloniler tespit edilip sayıldıktan sonra bu kolonileri temsil edecek şekilde kolonilere koagulaz testi uygulanır. Test sonucu pozitif ise sayılmış olan koloniler dillüsyon katsayısı ile çarpılarak St aureus sayısı kob/g (ml) olarak sonuç belirtilir.




aLinti..

__________________

#MustafaKemaLAtatürkTorunuyum..ღ ❦

{22~02~`22..∞}
{09~09~`22..ღ}